非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒_JD-ZWSJ01_中国·KY开元批量发货_Peakanyo ya PCR ya mohlare wa lepere la sešireletši sa Afrika_专业试剂选中国·KY开元非？科

　　针对非洲猪瘟的情况

，积的进行检测工作是尽可能的；そ】档纳硪约敖档途盟鹗У某烈胧
。全面发展生物安全培训: 由动物疫病防控部门或行业协会牵头

，组织有实战经验的生物安全专家对沉点猪场的兽医主管进行培训、钻研

，对照题自查自纠

，排除隐患
。酌情组织有关专家对规；沓〗猩锇踩蠹坪拖殖∫患排查
。提高生猪无害化处置能力: 研发和利用切合生物安全、伦理和环保的生猪扑杀、销毁、消毒技术

，同时钻研疫区受威胁猪的资源化利用
。

　　(快提核酸扩增试剂盒)

　　【产品名称】

　　通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)

　　英文名称：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence Probing)

　　[预期用处]

　　本试剂盒重要用于检测疑似习染猪抗凝血及临床病猜中的非洲猪瘟病毒(ASFV, African Swine Fever

　　Virus)核酸

，合用于非洲猪瘟病毒的检测、辅助诊断和盛行病学调查
。

　　【试剂盒组分】

　　1、试剂盒组成及贮藏前提

　　2、需自备资料：生理盐水、无菌枪头、荧光PCR反映管、记号笔等
。

　　【操作步骤】

　　一、样品造备

　　1、 血液样品：采集抗凝血(抗凝剂为EDTA)或血清样品

，编号备用
。

　　2、 组织样品：采集脾脏、肝脏、淋趋附、扁桃体等病变组织样品或软蜱0.1g(黄豆粒大幼)

，眼科剪剪碎于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨

，再加1mL生理盐水混匀

，4°C前提下8000 rpm/分钟离心2分钟

，取上清液于灭菌离心管中

，编号备用
。

　　二、DNA提取

　　取反映液A 20μL别离参与到新的1.5mL离心管

，参与抗凝而或血清或组织上清液2μL混匀

，室温(20°C左右)静置3分钟

，参与反映液B 20μL,奏乐混匀即可

，若为抗凝全血

，则需8000rpm/分钟再离心2分钟后做为待检DNA溶液
。

　　二、PCR扩增

　　1、配液：取出PCR反映液、酶混合液

，在室温*消融后

，充分混匀

，瞬离

，可将酶混合液全数取岀直接参与到PCR反映液中

，充分混匀

，瞬离后按每份20μL分装使用;或依照每份PCR反映液17μL, 酶混合液3μL的比例取肯定的试验用量

，混合两种反映液,瞬离后依照每份20μL分装到荧光PCR 反映管中

，渣滓试剂立即冻存;(操作过程要把稳避光)

　　2、加样扩增：别离向上述PCR反映管中参与5μL样本 DNA或阴性对照或阳性对照

，混匀并瞬离, 放入荧光PCR仪上运行以下法式：

　　荧光通路选择FAM,在40循环阶段每个循坏的55°C时网络荧光信号
。设置扩增系统为25μL,同时要选择 passive reference 和 quencher 为 none 的模式
。

　　(注:若荧光PCR仪(如ABI7500)按说明书中的反映法式设置后因持温功夫短无法运行,可将预扩增和PCR扩增前提调换为95°C： 5秒 55°C：30秒
。)

　　【了局判定】

　　1、 基线和阈值设定;基线调整取6-15个循环的荧光信号

，阈值设定以阈值线刚好超过阴性对照检测 荧光曲线的高点为准则°

　　2、 质量节造：反映实现后

，阴性对照的检测了局应无特定的扩增曲线

，Ct值为>38或无;阳性对照 的Ct值应≤30.0,且显著的扩增曲线;不然尝试视为无效
。

　　3、 样品判定：待检样品荧光信号有指数型增长

，且了局显示Ct值<35.O,汇报为阳性;未检测到Ct 值或Ct值>38或无显著扩增曲线

，则样品判定为阴性
。35≤Ct值#8时

，复检一次

，沉复了局为阳性者判定为阳性

，不然判定为阴性
。

　　【当苦衷项】

　　1、尝试前请仔细阅读本试剂盒说明书

，严格依照操作步骤执行

，在操作过程中对功夫、试剂体积等精 确节造能够获得好的了局
。

　　2、 尝试室应严格依照有关划定分区治理
。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有产格要求
。

　　3、 有关耗材确保干净、无菌

，核酸提取实现后尽快进入下一步试验或冷冻保留
。

　　4、预混后的试剂应尽量在短期内使用结束

，户表使用应在加冰袋的泡沫盒保留

，逐日试验结束应实时 冷冻保留
。

　　5、 对于荧光PCR管要预防徒手或使用过的手套接触

，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套
。

　　6、 冻存试剂使用前应于室温下*消融

，充分混匀

，瞬时离心使液体*沉于管底
。

　　7、 样品、阴性对照封盖后

，在透风环境增长阳性对照并实时封盖

，预防组分间及气溶胶等假阳性传染°

　　8、 扩增反映结束后的PCR管严禁开盖,应和试验产生的其它拔除物一路实时网络,远离PCR尝试室 进行无害化处置
。

　　【规格】50头份/盒
。

　　【贮藏与有效期】-20°C以下避光保留

，有效期12个月
。